液相色谱仪的工作原理

一、液相色谱仪的工作原理

高效液相色谱仪工作原理；高压泵将贮液罐的流动相经进样器送入色谱柱中，然后从检测器的出口流出，这时整个系统就被流动相充满。当欲分离样品从进样器进入时，流经进样器的流动相将其带入色谱柱中进行分离，分离后不同组分依先后顺序进入检测器，记录仪将进入检测器的信号记录下来，得到液相色谱图。

高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送，色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万），同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。

扩展资料

高仔袜猜效液相色谱仪配置高压二元泵或者低压四元泵，而泵的冲程体积以及混合器的体积大小，均会对色谱基线噪音水平产生影响，特别是在梯度洗脱的时候。一般地泵的冲程体积越小以及混合器的体积相对越大，由输液造成的脉冲相对越小，对于梯度变化的响应能力越高，基线越平缓，

在应用二好桐元泵的时，需要注意的是，当二元混合中的其中一元流动相的比例小于5%的时候，特别是在使用正相等度洗脱对一些医药中间体及终产品进行手性拆分的时候，最好使用单泵预混合的方式。避免由于泵在低比例时泵液精度相对较差，而导致色谱基线出现冲程相关峰，

参考资料念型来源；百度百科--高效液相色谱仪

二、液相色谱仪二元高压，四元低压，等度系统在检测上有什么区别

二元高压是指有两个输液泵，分别输送一种流动相，实现梯度洗脱；四元低压是由一个输液泵，通过时间比例阀敬州次序选择不同流动相而实现梯度洗脱，四元低锋带压可以控制四条流路。等度系统是指用一个输液泵来输送一条流路，流动相只有一种，不能调整比例。

配置区别：

1. 等度洗脱只需要配置一台高压泵，配置相对简单，成本低；

2. 二元高压梯度洗脱需要配置两台高压泵，一个混合器及连接管理，配置较高，成本高；

3. 四元低压梯度洗脱需要配置一台高压泵、一个四元比例阀、一台在线脱气机、一个混合器（视情况而定，可不选）及银稿芦连接管路，配置较高，成本略低于二元高压。

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区别是流动相，二元高压可以同时走两路流动相，四元可以走四路，等度只可以走一路

三、hplc原理及操作

hplc原理及操作：储液器中的流动相被高压泵打培码入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内。

由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别。

定义：大中弯

高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography\HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。

①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为滚闷了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。

②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。

四、高相液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量注意事项

使用高相液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量需要注意以下事项：

1. 实验开始前，确保仪器（如高压泵、检测器、色谱工作站等）已经正确连接并开启。

2. 准备流动相，甲醇和0.01moL/L磷酸盐缓冲液溶液（pH=3.5）按照3:7的比例配制500mL流动相，需保证流动相经0.45μm滤膜过滤并置于超声脱气机上脱气15min。

3. 配置咖啡因标准储备液，浓度为1.0mg/mL，加入少量甲醇加热溶解，用甲醇定容至100mL。

4. 样品处理，如称取一定量的咖啡粉试样，用蒸馏水煮沸并冷却，转移至上层清液至100mL容量瓶中，定容至刻度。

5. 进行高效液相色谱仪的设置，柱敬森冲温为室温，流动相为甲醇/水=60/40，流亮歼动相流量为1.0mLmin-1，检测波长为275nm。

6. 在基线平直后，分别注入咖啡因标准系列溶液10μL，记录峰面积和保留春圆时间。

以上信息仅供参考，建议咨询专业人士获取更准确的信息。

高相液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量注意事项。实验一高效液相色谱法测定饮料中的咖啡因咖派汪啡因(caffeine)又名咖啡碱、属甲基黄嘌呤化合物，化基唯学名称为1，3，7-三甲基黄嘌呤、具有提神醒脑等刺激中枢神经作用、但易上瘾。为此。各国制定了咖啡因在饮料中的食品卫生标准，美国、加拿大、阿根廷、日本、菲律宾规定饮料中咖啡搏羡培因的含量不得超过200mg/L，我国到目前为止咖啡因仅允许加入到可乐型饮料。

五、高效液相色谱仪的高压输液系统有何作用

高压输液系统俗称高压泵，是整台机器的动力来源，流动相由高压泵从试剂瓶中抽出，流经进样口，色谱柱，检测器最后流出色谱仪。可以颤虚前说没有高压泵的提供的压力，仅靠流动相自身的重力和茄清扩散，整个过程要漫长到难以忍受的程度誉衫。早期液相色谱是没有高压泵的，一个样的分析动辄数十小时甚至数天，而且色谱柱也不像现在吸附能力强，这种只能叫液相色谱。自从高压泵被引入液相色谱后，色谱柱分离变得更高效，分析时间极大缩短，一个样品只用数分钟即可，这样的液相色谱才叫高效液相色谱。