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家用磨碎机可以制作草粉吗(磨碎机是磨中药的那种)

来源:www.ahlulin.com   时间:2023-01-24 13:28   点击:136  编辑:戚妍   手机版

家用磨碎机可以制作草粉吗(磨碎机是磨中药的那种)

可以做的啊啊

如何研磨小鼠器官成粉末,提基因组用

基因组DNA提取原理及方法

一、原理

DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物,一般都溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂,它们的钠盐比游离酸易溶于水,RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA在水中为10g/L,呈黏性胶体溶液。

在酸性溶液中,DNA天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。要从细胞中提取DNA 时,先把DNP抽提出来,再把P除去,再除去细胞中的糖,RNA 及无机离子等,从中分离DNA 。 DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。DNP在低浓度盐溶液中,几乎不溶解,如在0.14 mol/L的氯化钠溶解度最低,仅为在水中溶解度的1%,随着盐浓度的增加溶解度也增加,至1mol/L氯化钠中的溶解度很大,比纯水高2倍。RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小,在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此,在提取时,常用此法分离这两种核蛋白。

苯酚/氯仿作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA 。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态,真核细胞DNA的分离通常是在EDTA及SDS一类去污剂存在下, 用蛋白酶K消化细胞获得。诸多生物试剂公司现已有各种类型DNA提取试剂盒出售。

二、材料及试剂

1. GENTRO DNA提取试剂盒

2. 异丙醇

3. 70%酒精

三、操作步骤

(一)、从全血中提取DNA

1. 溶血:加300ul的肝素或EDTA二钠抗凝的全血到含RBC Lysis Solution 900ul 的1.5ml EP管, 室温静置1min,期间,轻轻颠倒混匀10次。13000 ~16000 g离心20s。

2. 弃上清液,将管底的白色沉淀用枪头吹散,使白细胞在残留的液体中悬浮。

3. 加300ul的Cell Lysis Solution于EP管中, 充分混匀。

4. 加100ul的Protein Precipitation Solution于EP管中, 充分混匀,13000 ~16000g离心3min.

5. 取上清液,加300ul的异丙醇,充分混匀颠倒50次,可见白色絮状沉淀,13000 ~16000 g离心1min 。

6. 弃上清液,加入70%的酒精500ul,13000~16000 g离心1min 。

7. 弃上清液,加入DNA Hydration Solution 50ul, 充分混匀,65℃5min使DNA 完全溶解。

8. 紫外分光光度计测定OD260/280,比值大于1.8即可。

(二)、从组织中提取DNA

9. 取液氮冷冻的叶片2-3片, 在液氮冷冻下迅速研磨成粉末。

10. 将粉末放入到1.5 ml离心管中,然后加入缓冲液“S”750ul, 充分混匀。

11. 将离心管置于65℃水浴中1-2小时,水浴过程中温和混匀几次。

12. 取出离心管, 每管加入等体积的酚-氯仿(V/V=1:1)溶液600-700ul,混匀后离心,10000rpm, 10分钟。

13. 上清液移入另一离心管中,加入等体积的氯仿,混匀后,10000rpm, 6分钟。

14. 将上清液移入另一离心管中,加入0.6倍体积的异丙醇,轻轻混匀,静置一段时间,然后用枪头勾出DNA,并用70%乙醇冲洗2次。

15. 勾出的DNA,真空干燥后将其溶于500ul 1×TE中。

16. 加入3ul RNA 酶溶液,37℃保温1 小时。

17. 加入等体积的酚-氯仿溶液, 轻轻混匀后, 10000rpm离心6分钟。

18. 取上清液,加入等体积的氯仿,轻轻混匀后,10000rpm离心6分钟。

19. 取上清液,入1/10体积3M醋酸钠,混匀后,加入2倍体积冷的无水乙醇(或95%乙醇)。

20. 轻轻混匀静置一会儿后,用枪头勾出DNA, 用70%乙醇冲洗2次后,真空干燥。

21. 依所提DNA量加入20-50ul的1×TE溶解DNA。

22. 测定DNA 的浓度,取少量样品跑电泳, Agarose 胶的浓度为0.8%。

23. 样品在4℃下保存备用。

附: 提DNA 所用试剂配方:

1. 1. 1M Tris-Cl (1L:800ml H2O中加121.1g Tris, 用HCl调pH 至8.5后定容至1升, 灭菌)

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